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        選「柱」不迷茫!這些色譜填料關鍵參數早知道→

        閱讀:253      發布時間:2025-12-10
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        想判斷一款色譜填料好不好用?


        其實核心要看幾個 “隱藏指標"!孔徑、碳載量、表面積、鍵合覆蓋率這四大核心參數,直接決定了色譜填料能否發揮應有作用,你都了解嗎?

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        01

        孔徑(埃,?)

        孔徑是描述硅膠等色譜填料內部孔隙大小的關鍵參數,指填料顆粒內部孔隙通道的平均直徑或有效直徑,直接影響樣品分子能否進入孔隙內部與固定相發生作用,進而左右色譜分離效果。


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        小分子分析常用孔徑

        小分子分析中常用的孔徑為60-120 ?,以飛諾美經典Luna系列為例,其便采用100 ?孔徑的填料顆粒,對應的小分子截留分子量約為10000道爾頓。


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        大分子蛋白分析常用孔徑

        300 ?大孔徑被應用于飛諾美反相大分子蛋白分析柱Jupiter系列(包含Jupiter 300和Jupiter Proteo),可為蛋白質和多肽的表征、純化提供優化反相解決方案,幾乎能實現所有蛋白的識別、純化與分析,通常適用于分子量>10000道爾頓的化合物分析。


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        大分子/聚合物SEC分析常用孔徑

        更大孔徑常用于尺寸排阻色譜(SEC)的大分子/聚合物分析,如 Yarra 系列就有 145 ?、290 ?、500 ?等多種孔徑可選,可適配不同分子量目標物的分離需求。


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        02

        表面積(m2/g)

        表面積指色譜填料骨架材料的外表面及其孔的內表面,增大表面積可直接提高載樣量,但需要注意的是,增大孔徑往往會伴隨表面積的減小。


        以飛諾美Luna Omega系類為例,Luna Omega硅膠顆粒采用專有熱處理全多孔顆粒技術,不僅能提升顆粒惰性、優化顆粒形態、保證孔隙度一致性,還能通過該工藝消除微孔,進一步增強色譜柱的柱效、惰性與重現性。和傳統全多孔硅膠相比,經熱處理消除微孔的填料,還具備更低的表面積參數。

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        03

        鍵合相覆蓋率(µmole/m2)

        鍵合相覆蓋率指填料表面鍵合官能團的密度,也叫表面覆蓋率,本質是填料表面活性位點被鍵合官能團占據的比例,直接影響色譜分離的選擇性、保留能力及穩定性。


        我們可以用 “開學典禮座椅" 通俗理解:把填料顆粒比作操場,座椅是載體表面活性位點,坐了同學的座椅對應被鍵合官能團占據的位點,空置的座椅則對應未被鍵合的游離硅烷醇。


        一般來說,表面覆蓋率較高的色譜柱,游離硅烷醇基濃度更低,化學穩定性更強,不同色譜柱間的重現性也更優,且材料的保留能力會隨覆蓋率提升而增強。



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        04

        碳載量(%)

        碳載量是固定相中碳元素占固定相總重量的百分比,其數值會隨表面覆蓋率和固定相中烴鏈長度變化,烴鏈配體的碳載量通常在 5%-31% 區間。


        它和鍵合相覆蓋率相關但側重不同:覆蓋率關注 “活性位點占用比例",碳載量關注 “實際鍵合碳元素的總質量占比"。在相同覆蓋率下,碳鏈越長(如 C18>C8>C4),單條鏈含碳量越高,總碳載量也越高。


        碳載量越高,填料基于疏水相互作用的保留能力越強,在反相色譜分析中,對疏水性物質的保留時間也會相應延長。以核殼 Kinetex 的 5 款 C18 為例,因填料技術和表面修飾不同,其碳載量范圍在 9%-12% 之間,能為分析過程提供差異化的疏水性、氫鍵供受能力、離子交換作用力及物質選擇性。




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