激光共聚焦顯微鏡的工作流程介紹

閱讀：98發布時間：2025-12-21

激光共聚焦顯微鏡是基于激光掃描與共軛聚焦原理的高分辨率光學顯微成像技術，通過排除非焦平面雜散光干擾，實現亞細胞級分辨率的二維與三維成像，廣泛應用于生物醫學、材料科學等領域。

工作流程如下：

激光聚焦：單色性好的激光束被聚焦到樣品的特定焦平面上，激發熒光探針產生熒光。

針孔篩選：只有焦平面上的熒光信號能通過探測器前的針孔，來自非焦平面的雜散光會被針孔阻擋，從而獲得較高的圖像對比度。

掃描成像：激光束逐點、逐行掃描整個焦平面，計算機收集信號并重建出二維圖像。通過沿 Z 軸移動樣品，獲取一系列不同深度的切片，然后可重構出樣品的三維立體圖像。

激光共聚焦顯微鏡的主要特點：

高分辨率與對比度：有效排除非焦平面干擾，橫向分辨率可達約 120-200nm，成像質量遠超傳統寬場熒光顯微鏡。

三維立體成像：無需物理切片即可對樣品進行 “光學切片”，并通過軟件重構出三維結構，清晰展現樣品的空間形態。

多色熒光成像：可配備多種波長的激光器，同時激發樣品中不同的熒光探針，在同一張圖像上區分不同的目標結構。

活細胞動態觀察：對樣品損傷小，可在控溫、控濕等環境下，長時間實時追蹤活細胞內的動態生理過程。

強大的分析能力：配套軟件可進行圖像增強、細胞計數、熒光強度定量、共定位分析等多種數據處理。

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