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        中藥丸劑DNA提取的完整步驟

        閱讀:437      發(fā)布時(shí)間:2025-11-27
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        藥丸劑是藥材細(xì)粉或藥材提取物加適宜粘合劑或輔料,制成的球形或類球形的固體制劑,是中成藥古老的劑型之一。PCR的DNA檢測(cè)方案正在成為中藥材真?zhèn)舞b定的金標(biāo)準(zhǔn),但是加工后的中藥丸由于成分復(fù)雜,包括粘合劑和輔料對(duì)PCR反應(yīng)有抑制作用,導(dǎo)致DNA檢測(cè)方法不能有效應(yīng)用于這個(gè)領(lǐng)域。本試劑盒通過自主開發(fā)的DNA提取方法,對(duì)一些PCR抑制成分進(jìn)行有效的清洗,從而達(dá)到有效的DNA提取純度。提取的DNA可直接用于PCR反應(yīng),為藥材的真?zhèn)舞b定和摻假檢測(cè)提供了一個(gè)可靠的檢測(cè)方案。
        ‌裂解處理‌:
        將丸劑研磨成粉末,加入含蛋白酶K的裂解液(如CTAB緩沖液),56℃水浴1-2小時(shí),破壞細(xì)胞膜并降解蛋白質(zhì)。若樣本含多糖,可加入β-巰基乙醇抑制干擾‌。
        ‌吸附純化‌:
        ‌磁珠法‌:將裂解液與磁珠混合,DNA特異性吸附后,用含離液鹽的洗滌液去除雜質(zhì)‌。
        ‌離心柱法‌:裂解液過硅膠膜柱,DNA結(jié)合后,用乙醇洗滌鹽分和色素‌。
        洗脫與質(zhì)檢‌:
        用TE緩沖液或無菌水洗脫DNA,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)A260/A280比值(1.8-2.0為合格)‌。電泳觀察條帶完整性,避免拖尾或彌散‌。
        注意事項(xiàng):
        操作全程戴手套,避免DNA酶污染‌。
        多糖含量高時(shí),可增加洗滌次數(shù)或使用低pH值法‌。
        陳舊樣本需延長(zhǎng)裂解時(shí)間。
         

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