用Fucci進行口腔上皮細胞系（Ca 9-22）的細胞周期觀察

用Fucci進行口腔上皮細胞系（Ca 9-22）的細胞周期觀察

■基于延時拍攝成像的細胞周期觀察事例

Fucci（Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator）是一種能夠對細胞周期進程進行實時有效監控的熒光探針。利用基恩士的一體化熒光顯微成像系統BZ-X，對已導入Fucci的口腔上皮細胞系（Ca 9-22）進行拍攝，期間以30分鐘為間隔，進行了120次、共計60小時的延時拍攝成像。
利用多點拍攝功能，以30分鐘為間隔，對6孔培養板的各培養孔，進行單次3點，共計18點的連續拍攝。

圖片/視頻來源：
新潟大學醫學部
基礎醫學系 顯微解剖學（解剖學第3講座）
三上剛和 先生

■細胞周期觀察中的問題點

在用活細胞（Live cell）進行長時間延時拍攝成像的過程中，必須始終維持恒定的溫度、CO2濃度和濕度。解決上述問題的簡易方法，就是掐準拍攝時機，僅在拍攝時將標本從恒溫箱中取出，進行拍攝。但是這種方法又會衍生出“難以再現拍攝位置"、“移動標本會改變其狀態，存在污染風險"、“每次拍攝時都要進行人工維護"等諸多問題。

一體化熒光顯微成像系統BZ-X采用臺面式小型恒溫箱，能夠在維持標本環境恒定的同時，進行指定次數的自動拍攝。還能借助多點多條件拍攝功能，在改變倍率、濾光片等拍攝條件的同時，進行多點拍攝，只需以簡單操作進行延時拍攝成像，就能以超高的效率，加快推動實驗進程。

★如果引進一體化熒光顯微成像系統BZ-X

·       全電動控制，操作簡單便捷。無需暗室，可以在臺面上安裝小型恒溫箱，輕松實現活細胞成像。

·       利用由制冷相機和專用鏡頭構成的高靈敏度光學系統，能夠在盡量減少細胞損傷的同時，獲取高精細的熒光圖像。

·       能夠一次性對多個標本進行延時拍攝，便于開展相同條件下的比較檢驗。

■什么是Fucci？

Fucci技術用發出紅色熒光的mKO2（monomeric Kusabira-Orange2）熒光蛋白質，結合G1期（分裂結束后，細胞開始為DNA復制做準備的時期）增長量超大的Cdt1，再用發出綠色熒光的mAG（monomeric Azami-Green1）熒光蛋白質，與Geminin（在從DNA復制到細胞分裂前的S/G2/M期的增長量超大）相結合，就能實現細胞周期進程的可視化，對DNA復制及細胞分裂的情況進行實時觀察。
自2008年開發以來，Fucci技術就在不斷改良，陸續推出了對細胞核內及細胞整體進行Fucci信號標記的Fucci（N+C）；在熒光蛋白質中應用mCherry和mVenus，使G1期和S/G2/M期更易分離的Fucci2；還有追加細胞周期間期（G1、S、G2期）識別能力，借此辨識4種細胞周期的Fucci（CA）等等。如今，Fucci技術已經被廣泛用于發生學、再生醫學、癌腫瘤學等領域，研究與細胞周期息息相關的各類生命現象。

基恩士 一體化熒光顯微成像系統 BZ-X1000系列，

在醫學與生命科學等領域應用廣泛。

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