快速內切酶作為基因工程領域的得力工具,憑借其高效、便捷的特性,在分子生物學實驗中應用廣泛。
快速內切酶典型實驗場景:
基因克隆與載體構建
流程:使用快速內切酶切割目的基因和載體DNA,通過T4 DNA連接酶連接片段,實現基因克隆。
優勢:快速酶切縮短克隆周期,提高實驗效率。例如,雙酶切反應中,共用緩沖液(如CutEZ™ Buffer)的快速內切酶可簡化操作步驟。
DNA酶切圖譜分析
流程:通過限制性內切酶切割DNA,結合電泳分離片段,構建酶切圖譜。
優勢:快速內切酶支持短時間內完成多酶切反應,加速圖譜構建。例如,使用不同酶組合切割質粒或基因組DNA,快速驗證插入片段位置或基因結構。
Southern雜交
流程:基因組DNA經內切酶切割后,通過電泳分離并轉膜,與特異性探針雜交檢測目標序列。
優勢:快速內切酶可高效切割基因組DNA,確保雜交信號的靈敏度和特異性。
染色體步移(Chromosome Walking)
流程:通過內切酶切割基因組DNA,連接接頭后進行PCR擴增,逐步克隆未知序列。
優勢:快速內切酶支持快速酶切和連接反應,加速步移進程。
基因編輯驗證
流程:在CRISPR/Cas9等基因編輯實驗中,使用內切酶切割目標位點,通過電泳或測序驗證編輯效果。
優勢:快速內切酶可精準切割編輯后的DNA,支持高通量驗證。
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