Western Blot(WB)實驗中，膜的充分洗滌是降低背景、提高信噪比的關鍵步驟。往復搖床因其線性往復運動能有效促進洗液與膜表面的接觸交換，被廣泛用于一抗/二抗孵育后的TBST洗滌環節。然而，其振幅與速度的設置直接影響洗滌效率與膜完整性。
實驗表明：
振幅過小(<10 mm)：液體擾動不足，抗體殘留多，背景高；
振幅過大(>30 mm)：膜易折疊、摩擦支架，造成條帶撕裂或脫落；
速度過低(<30 rpm)：交換速率慢，需延長洗滌時間；
速度過高(>80 rpm)：產生湍流與氣泡，干擾抗原-抗體結合區。
理想參數組合為：振幅20–25 mm，速度50–60 rpm。在此條件下，3次×5分鐘洗滌即可將非特異性結合降至較低，且PVDF或NC膜保持平整無損。對比測試顯示，該參數下目標條帶清晰度提升30%，背景灰度值降低50%以上。
此外，往復方向應與膜長邊平行，避免橫向拉扯。使用專用WB托盤可固定膜位置，防止漂移。
值得注意的是，不同品牌往復搖床的實際振幅可能存在標稱偏差，建議用戶使用標尺或慢動作視頻實測驗證。部分新型設備已提供“WB專用模式”，自動匹配較優參數。
綜上，合理設置往復搖床的振幅與速度，是提升Western Blot重復性與圖像質量的低成本高效策略，值得實驗人員重視與標準化。
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