薄層色譜掃描儀如何工作？深度解析吸收法、熒光法與熒光猝滅法

　　薄層色譜掃描儀通過特定光源對薄層板上的斑點進行掃描，利用吸收法、熒光法或熒光猝滅法實現(xiàn)定量分析，其核心原理與操作方式如下：

　　吸收法：基于光吸收的定量分析

　　吸收法利用斑點對特定波長光的吸收特性進行定量。光源（如氘燈或鎢燈）發(fā)射的光經(jīng)單色器分光后，形成單色光束照射斑點。光電倍增管檢測透射或反射光強度，光強減弱程度與斑點中組分濃度成正比。由于薄層板的散射效應，吸光度與濃度關系需用Kubelka-Munk理論校正。雙波長掃描技術通過選擇樣品吸收峰波長（λs）和參比波長（λR），扣除背景干擾，顯著提升基線穩(wěn)定性，適用于復雜基質樣品。

　　熒光法：高靈敏度熒光檢測

　　熒光法針對自身熒光或經(jīng)衍生化后產(chǎn)生熒光的物質。光源（如氙燈）激發(fā)斑點中的熒光物質，發(fā)射的熒光經(jīng)單色器分光后由光電倍增管檢測。熒光強度與物質濃度成正比，靈敏度比吸收法高1-3個數(shù)量級。雙波長熒光掃描通過選擇激發(fā)波長（λex）和發(fā)射波長（λem），避免拉曼光干擾，進一步提升選擇性。該方法適用于痕量藥物成分、環(huán)境污染物（如亞硝酸鹽）的檢測。

　　熒光猝滅法：間接檢測非熒光物質

　　熒光猝滅法利用熒光物質與待測物相互作用導致熒光信號減弱的現(xiàn)象，間接測定非熒光物質含量。例如，在含熒光指示劑的薄層板上，非熒光農(nóng)藥與熒光物質結合后，斑點呈現(xiàn)暗灰色，通過測量熒光強度衰減程度實現(xiàn)定量。該方法靈敏度高，適用于金屬元素（如鐵、銀）、藥物成分（如乙酰半胱氨酸）的檢測，但需選擇合適的熒光探針（如羅丹明B、碳量子點）。

　　操作模式與優(yōu)化策略

　　掃描軌跡包括直線掃描（適用于規(guī)則斑點）和鋸齒掃描（補償不規(guī)則斑點誤差）。為減少誤差，需嚴格控制點樣量、展開距離和顯色均勻性，并采用隨行標準法（樣品與對照品同板展開）。雙波長技術通過背景扣除和基線校正，顯著提升定量精度，尤其適用于薄層厚度不均或顯色不均勻的樣品。