DAB顯色試劑盒操作步驟及注意事項

　　DAB顯色試劑盒是一種基于辣根過氧化物酶(HRP)催化反應的顯色試劑盒，廣泛應用于免疫組化、原位雜交、Western Blotting、Southern Blotting、Northern Blotting及EMSA等實驗中，用于檢測HRP標記的抗體或探針結合的靶標。
 

　　DAB顯色試劑盒操作步驟(以組織切片為例)

 

　　樣本準備：
 

　　組織切片經抗原修復、封閉后，與HRP標記的抗體孵育。
 

　　洗滌：
 

　　用TBS或PBS洗滌3-5次，每次3-5分鐘，去除未結合抗體。
 

　　配制DAB工作液：
 

　　按比例混合A液(濃縮DAB)與B液(稀釋液含H?O?)，混勻后避光備用。
 

　　顯色：
 

　　滴加DAB工作液覆蓋樣本，室溫避光孵育1-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況。
 

　　終止反應：
 

　　用蒸餾水洗滌1-2次，去除殘留顯色液。
 

　　后續處理：
 

　　必要時用蘇木素復染細胞核，脫水透明后封片觀察。
 

　　注意事項：
 

　　安全防護：
 

　　DAB及H?O?具有潛在致癌性，操作時穿實驗服、戴手套，避免直接接觸皮膚或吸入。
 

　　避免背景：
 

　　顯色前確保充分洗滌，減少非特異性結合。
 

　　若背景過深，可縮短顯色時間、降低抗體濃度或使用更強洗滌液。
 

　　顯色控制：
 

　　顯色液需現配現用，避光保存。
 

　　顯色時間根據靶標豐度調整，避免過度顯色導致信號飽和。
 

　　兼容性驗證：
 

　　首使用時建議預實驗，確定最佳抗體濃度和顯色時間。